MARK2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403714-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MARK2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MARK2 Double Nickase Plasmid (h) e il MARK2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MARK2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MARK2 Antibody (B-1): sc-365405
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MARK2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403714-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MARK2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403714-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MARK2 umano (microtubule affinity-regulating kinase 2) è una chinasi serina/treonina della famiglia PAR-1 che fosforila proteine associate ai microtubuli, tra cui tau, per regolare la stabilità dei microtubuli e la dinamica del citoscheletro. Agisce a valle dei moduli di segnalazione della polarità e contribuisce all’instaurarsi della polarità apico–basale, alla divisione cellulare asimmetrica e all’organizzazione della rete actina–microtubuli. L’attività di MARK2 si interfaccia con il controllo del ciclo cellulare, la differenziazione neuronale e la segnalazione responsiva allo stress, collegandola a processi quali la specificazione dell’assone e il trasporto intracellulare. Una segnalazione di MARK2 deregolata è stata associata a programmi di fosforilazione alterati e a difetti di polarità osservati in diversi contesti di ricerca sulla neurodegenerazione e sul cancro.
MARK2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MARK2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MARK2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MARK2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MARK2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.