MARCKS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400837

Panoramica

MARCKS (substrato C della chinasi ricco in alanina miristoilato, myristoylated alanine-rich C-kinase substrate) è una proteina associata alla membrana che regola l’actina, funge da importante substrato della protein chinasi C e modula la disponibilità di fosfatidilinositolo 4,5-bisfosfato (PIP2) sulla membrana plasmatica. Attraverso un ciclo dipendente dalla fosforilazione tra compartimenti di membrana e del citoscheletro, MARCKS influenza l’organizzazione dei filamenti di actina, la forma cellulare, l’adesione, la motilità, il traffico vescicolare e l’accrescimento dei neuriti. MARCKS partecipa a reti di segnalazione collegate a PKC, alla regolazione calcio/calmodulina e alla dinamica dei fosfoinositidi, che coordinano il rimodellamento del citoscheletro e la segnalazione di membrana. Una deregolazione dell’espressione o della fosforilazione di MARCKS è stata associata a fenotipi alterati di migrazione e invasione ed è stata studiata in contesti quali la biologia dei tumori, i processi di neurosviluppo e la segnalazione infiammatoria.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MARCKS (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MARCKS in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MARCKS insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MARCKS a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MARCKS.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MARCKS per lo studio della segnalazione di MARCKS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MARCKS critici per la funzione di MARCKS
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MARCKS per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MARCKS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MARCKS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MARCKS. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MARCKS Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MARCKS (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MARCKS per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MARCKS definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.