MAPKAP-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404288-ACT

MAPKAP1 codifica MAPKAP-1 (nota anche come mSIN1), una componente essenziale del complesso 2 del target meccanicistico della rapamicina (mTORC2) che contribuisce a determinare l’assemblaggio del complesso, la selettività per i substrati e la localizzazione subcellulare. Attraverso mTORC2, MAPKAP-1 sostiene la fosforilazione di chinasi della famiglia AGC come AKT (Ser473), SGK e PKC, collegando la segnalazione dei fattori di crescita alla sopravvivenza cellulare, al metabolismo, al rimodellamento del citoscheletro e alla migrazione. La segnalazione dipendente da MAPKAP1 si interseca con le reti PI3K–AKT–mTOR, frequentemente alterate nella biologia dei tumori e nella disregolazione metabolica. Un’espressione o un’attività di via di MAPKAP1 alterate sono state associate a cambiamenti della capacità proliferativa, delle risposte allo stress e di fenotipi invasivi in diversi contesti cellulari.

MAPKAP-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAPKAP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MAPKAP-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAPKAP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAPKAP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MAPKAP-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAPKAP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MAPKAP-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MAPKAP-1 nelle cellule tumorali con espressione di MAPKAP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.