MAP-1A Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403259-ACT

MAP1A codifica la proteina associata ai microtubuli 1A (MAP-1A), un’impalcatura citoscheletrica ad alto peso molecolare che stabilizza i microtubuli e contribuisce a organizzare l’architettura assonale nei neuroni differenziati. Collegando i microtubuli a complessi associati all’actina e ad adattatori di carico, MAP-1A sostiene l’estensione dei neuriti, il trasporto intracellulare e il mantenimento sinaptico, processi centrali per la polarità neuronale e la connettività di rete. Una regolazione alterata della dinamica dei microtubuli e del trasporto assonale è una caratteristica ricorrente nella biologia delle malattie del neurosviluppo e neurodegenerative, rendendo MAP1A un nodo rilevante per studi meccanicistici della disfunzione citoscheletrica. L’espressione di MAP1A e il rimodellamento citoscheletrico dipendente da MAP-1A vengono pertanto spesso analizzati in modelli di maturazione neuronale, risposte allo stress e proteostasi.

MAP-1A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAP1A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MAP-1A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAP1A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAP1A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MAP-1A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAP1A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MAP-1A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MAP-1A nelle cellule tumorali con espressione di MAP1A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.