MAO-B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401732-ACT

MAOB codifica la monoamino ossidasi B (MAO‑B), un enzima flavino‑dipendente localizzato sulla membrana mitocondriale esterna che catalizza la deaminazione ossidativa di ammine biogene e alimentari. Regolando il catabolismo di dopamina, fenetilammina e monoammine correlate, la MAO‑B influenza l’omeostasi dei neurotrasmettitori e genera perossido di idrogeno come sottoprodotto, collegando la sua attività all’equilibrio redox mitocondriale e alle vie dello stress ossidativo. La funzione della MAO‑B si interseca con la segnalazione monoaminergica, il metabolismo mitocondriale e le risposte cellulari allo stress in tessuti neurali e periferici. Alterazioni dell’espressione di MAOB o dell’attività della MAO‑B sono state associate a processi neurodegenerativi e neuropsichiatrici, nonché a fenotipi molecolari legati a infiammazione e invecchiamento, a supporto di studi meccanicistici sul turnover delle monoammine e sui processi dipendenti dalle ROS.

MAO-B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAOB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MAO-B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAOB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAOB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MAO-B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAOB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MAO-B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MAO-B nelle cellule tumorali con espressione di MAOB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.