MAK Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-421549-LAC

Mouse Mak codifica per la male germ cell–associated kinase (MAK), una chinasi serina/treonina della famiglia correlata alle MAPK che modula la segnalazione dipendente dalla fosforilazione e i processi legati al ciclo cellulare. L’attività di MAK è stata collegata alla regolazione della progressione mitotica e dei programmi di differenziamento e, in tessuti specializzati, è stata implicata nella biologia delle ciglia e dei fotorecettori. La segnalazione chinasica deregolata che coinvolge MAK è stata studiata in contesti di proliferazione cellulare anomala e omeostasi tissutale, a sostegno della sua rilevanza per studi meccanicistici delle reti di chinasi in modelli di sviluppo e di malattia. MAK è quindi un bersaglio utile per interrogare il crosstalk tra controllo del ciclo cellulare, organizzazione del citoscheletro e trasduzione del segnale in sistemi murini.

Le particelle di attivazione lentivirale MAK (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Mak in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MAK (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Mak, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MAK. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Mak e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.