Plásmido CRISPR de Activación (h) MagT1: sc-404484-ACT

MAGT1 codifica MagT1, una proteína multipaso de membrana del retículo endoplásmico que actúa como transportador de magnesio y como componente del complejo oligosacariltransferasa (OST) implicado en la glicosilación N‑ligada. A través de sus funciones en la homeostasis iónica y la glicosilación de proteínas, MagT1 influye en el control de calidad del plegamiento proteico, la integridad de la vía secretora y los procesos de señalización que dependen de receptores correctamente glicosilados. La deficiencia de MAGT1 se asocia a fenotipos de inmunodeficiencia y se ha relacionado con una activación alterada de los linfocitos y con una mayor susceptibilidad a infecciones virales, lo que pone de relieve su relevancia para la señalización inmunitaria y las interacciones huésped–patógeno. La actividad desregulada de MAGT1 también se estudia en el contexto de las respuestas al estrés celular y de vías dependientes de glicoproteínas que afectan a amplios aspectos de la fisiología celular.

MagT1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAGT1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MagT1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAGT1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAGT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MagT1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAGT1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MagT1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MagT1 en células tumorales con expresión de MAGT1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.