MAGE-L2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424255-ACT

O gene Magel2 de camundongo codifica a MAGE-L2, um membro da família de antígenos de melanoma (MAGE) implicado na regulação neuroendócrina hipotalâmica e no desenvolvimento neuronal. A MAGE-L2 participa da homeostase proteica dependente de ubiquitina por meio de interações com complexos de ligase E3 de ubiquitina, influenciando o tráfego e a degradação (turnover) de proteínas celulares-chave. A atividade de Magel2 tem sido associada à regulação do ritmo circadiano, do balanço energético e das vias de sinalização leptina–melanocortina que moldam o comportamento alimentar e o metabolismo. A desregulação de MAGEL2 está associada a fenótipos neurodo desenvolvimento e metabólicos, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos de circuitos hipotalâmicos e proteostase.

MAGE-L2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Magel2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MAGE-L2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Magel2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Magel2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MAGE-L2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Magel2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MAGE-L2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MAGE-L2 em células tumorais com expressão de Magel2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.