Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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MAGE-A1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401056
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MAGE-A1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico MAGE-A1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MAGE-A1 Antibody (MA454): sc-20033
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MAGE-A1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401056 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
MAGEA1 codifica MAGE-A1, un antigene cancro-testis normalmente limitato alle cellule germinali ma spesso ri-espresso in diverse neoplasie, dove può contribuire a programmi trascrizionali e di proteostasi associati al tumore. MAGE-A1 appartiene alla famiglia MAGE di tipo I ed è implicato in interazioni proteina–proteina che modulano vie dipendenti dall’ubiquitina, inclusa la regolazione dell’attività delle ligasi E3 e del turnover di componenti della segnalazione. L’espressione aberrante di MAGEA1 è associata ad alterazioni del controllo del ciclo cellulare, delle risposte allo stress e di fenotipi di riconoscimento immunitario che modellano la biologia tumorale. In quanto antigene a espressione ristretta di linea, MAGE-A1 è anche ampiamente utilizzato come marcatore molecolare negli studi sull’immunogenicità tumorale e sulla derepressione epigenetica.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MAGE-A1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MAGEA1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MAGEA1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MAGEA1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MAGE-A1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MAGEA1 per lo studio della segnalazione di MAGE-A1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni MAGEA1 critici per la funzione di MAGE-A1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MAGEA1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal MAGE-A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MAGE-A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MAGEA1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal MAGE-A1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MAGE-A1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MAGEA1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MAGEA1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.