MAF1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-418170-LAC

MAF1 è un repressore trascrizionale conservato che collega i segnali legati a nutrienti e stress all’attività della RNA polimerasi III, modulando così la sintesi dei tRNA e di altri piccoli RNA non codificanti necessari alla capacità di traduzione proteica. La sua attività è regolata tramite fosforilazione a valle delle vie PI3K–AKT–mTOR e correlate, consentendo alle cellule di adeguare la richiesta biosintetica durante crescita, digiuno e risposte allo stress. Attraverso il controllo della trascrizione da parte di Pol III e dell’omeostasi della traduzione, MAF1 influenza la crescita cellulare, l’adattamento metabolico e i programmi di proteostasi. La disregolazione dell’attività di Pol III e delle reti di segnalazione a monte di mTOR a cui MAF1 partecipa è spesso studiata in contesti quali la crescita oncogenica, la biologia delle malattie metaboliche e fenotipi associati allo stress.

Le particelle di attivazione lentivirale MAF1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MAF1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MAF1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MAF1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MAF1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MAF1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.