MACF1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402923-LAC

Il fattore di cross-linking microtubuli–actina 1 (MACF1) è una grande impalcatura citoscheletrica della famiglia degli spectraplakins che coordina le interazioni tra microtubuli e F-actina per regolare la polarità cellulare, la migrazione e l’organizzazione intracellulare. Nelle cellule umane, MACF1 sostiene processi quali il turnover delle adesioni focali, il posizionamento di vescicole e organelli e il rimodellamento del citoscheletro, alla base della morfogenesi epiteliale e della crescita dei neuriti. È stato inoltre collegato all’integrazione dei segnali a livello corticale, includendo ruoli nella dinamica della via Wnt/β-catenina e nel traffico dipendente dal citoscheletro. La disregolazione del controllo citoscheletrico associato a MACF1 è stata studiata in contesti quali fenotipi neuroevolutivi, integrità della barriera e comportamento cellulare invasivo, rendendolo rilevante per studi meccanicistici dell’architettura tissutale e della motilità cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale MACF1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MACF1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MACF1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MACF1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MACF1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MACF1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.