MACF1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402923-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MACF1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MACF1 Double Nickase Plasmid (h) e il MACF1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MACF1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MACF1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402923-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MACF1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402923-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MACF1 (microtubule actin crosslinking factor 1) codifica una grande spectraplakina che collega fisicamente i microtubuli e l’F-actina per coordinare l’architettura del citoscheletro, il traffico intracellulare e la migrazione cellulare polarizzata. Attraverso le sue interazioni con le proteine che seguono l’estremità “plus” e con complessi regolatori dell’actina, MACF1 favorisce la cattura dei microtubuli alla corteccia e contribuisce a processi quali il turnover delle adesioni focali, la crescita dei neuriti e l’organizzazione epiteliale. MACF1 è stato inoltre implicato nelle dinamiche di segnalazione correlate a Wnt/β-catenina tramite funzioni di scaffold che influenzano la localizzazione dei componenti della via. La disregolazione o la mutazione di MACF1 è associata ad alterazioni della motilità cellulare e a fenotipi dello sviluppo ed è stata riportata in studi genomici sui disturbi del neurosviluppo e sul rimodellamento del citoscheletro associato al cancro.
MACF1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MACF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MACF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MACF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MACF1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.