Plasmide CRISPR d'Activation (h) M33: sc-402604-ACT

CBX2 code la protéine M33 du groupe Polycomb, un composant de la famille chromobox du complexe répressif Polycomb 1 (PRC1) canonique, qui reconnaît H3K27me3 et contribue au maintien du silençage transcriptionnel via la compaction de la chromatine et l’ubiquitinylation de l’histone H2A. En imposant des programmes de répression épigénétique stables, CBX2 participe à la spécification du destin cellulaire, au contrôle des gènes du développement et à la régulation de réseaux transcriptionnels associés à la prolifération. Une expression dérégulée de CBX2 ou une activité anormale de PRC1 est liée à des états de différenciation altérés et à des programmes transcriptionnels oncogéniques dans de nombreux contextes tumoraux, ce qui en fait un nœud utile pour étudier les mécanismes épigénétiques de la régulation de gènes pertinents pour la maladie. CBX2/M33 s’inscrit également dans des voies plus larges de régulation de la chromatine, coordonnées par la méthylation de H3K27 médiée par PRC2 et par d’autres lecteurs et enzymes d’écriture des modifications d’histones.

M33 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CBX2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

M33 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CBX2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CBX2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de M33. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CBX2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de M33 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie M33 dans les cellules tumorales présentant une expression de CBX2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.