Lyst Plasmide Double Nickase (m): sc-421511-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Lyst Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Lyst Double Nickase Plasmid (m) e il Lyst Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Lyst. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Lyst Plasmide Double Nickase (m) | sc-421511-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mouse Lyst (regolatore del traffico lisosomiale) codifica una grande proteina citosolica essenziale per la biogenesi degli organelli correlati ai lisosomi e per la dinamica di fusione–fissione delle vescicole. Coordina il traffico endolisosomiale, regola dimensioni e distribuzione dei lisosomi e supporta la corretta maturazione di fagosomi e granuli secretori nelle cellule immunitarie e pigmentarie. L’alterazione di Lyst compromette la funzione del sistema autofagia–lisosoma e la processazione dell’antigene, causando difetti nella degranulazione e nell’uccisione intracellulare. La disfunzione di LYST è associata a fenotipi simili alla sindrome di Chediak–Higashi, rendendo Lyst un gene chiave per lo studio della disregolazione immunitaria, della biologia della pigmentazione e delle vie associate ai lisosomi.
Lyst Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Lyst nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Lyst. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Lyst. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Lyst interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.