Lyn Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400463-ACT

Il gene umano **LYN** codifica Lyn, una tirosin-chinasi non recettoriale della famiglia Src che collega la segnalazione dei recettori immunitari e dei recettori per le citochine a cascate di fosforilazione a valle. Lyn regola le vie del recettore delle cellule B (BCR) e dei recettori Fc, modulando le soglie di attivazione attraverso il controllo coordinato della segnalazione PI3K/AKT, MAPK e NF-κB e mediante la modulazione del reclutamento delle fosfatasi. Nelle cellule ematopoietiche influenza proliferazione, sopravvivenza, migrazione e risposte dell’immunità innata, mentre in altri contesti può incidere su adesione e dinamica del citoscheletro tramite segnalazione associata alle integrine. Un’attività o un’espressione deregolata di **LYN** è stata collegata ad alterazioni dell’omeostasi immunitaria e al rimaneggiamento delle reti di segnalazione osservati nelle neoplasie ematologiche e nei meccanismi delle malattie infiammatorie.

Lyn Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LYN senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Lyn Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LYN nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LYN, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Lyn. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LYN nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Lyn nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Lyn nelle cellule tumorali con espressione di LYN silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.