Lumican Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402001

Panoramica

LUM codifica la lumicana, un piccolo proteoglicano della matrice extracellulare ricco di leucine che si lega alle fibrille di collagene e ne regola l’assemblaggio, la spaziatura e le proprietà biomeccaniche. Modulando l’organizzazione della matrice e l’adesione cellula–matrice, la lumicana influenza processi quali il rimodellamento tissutale, la riparazione delle ferite e la segnalazione stromale, che si intersecano con vie di controllo della migrazione, della proliferazione e delle risposte infiammatorie. Alterazioni dell’espressione di LUM o della sua distribuzione extracellulare sono state associate a fibrosi, fenotipi corneali e del tessuto connettivo e al rimodellamento del microambiente tumorale, rendendolo rilevante per lo studio dei meccanismi di malattia guidati dalla matrice. La lumicana è inoltre utilizzata come marcatore e nodo funzionale nella ricerca sugli stati delle cellule stromali e sull’omeostasi della matrice extracellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Lumican (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LUM in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LUM insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LUM a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Lumican.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LUM per lo studio della segnalazione di Lumican, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LUM critici per la funzione di Lumican
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LUM per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Lumican CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Lumican CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LUM. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Lumican Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Lumican (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LUM per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LUM definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.