Lumican Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402001-ACT

Il gene umano **LUM** codifica la lumican, un piccolo proteoglicano secreto ricco di leucine (SLRP) che organizza la fibrillogenesi del collagene e regola l’architettura della matrice extracellulare (ECM), l’idratazione e la biomeccanica dei tessuti. La lumican modula l’adesione, la migrazione e la proliferazione cellulare attraverso la segnalazione mediata dalle integrine e le interazioni tra ECM e fattori di crescita, influenzando la riparazione delle ferite, il rimodellamento stromale e le risposte infiammatorie. Alterazioni dell’espressione di **LUM** e della composizione proteoglicanica della lumican sono associate alla fibrosi e al rimodellamento del microambiente tumorale, in cui l’allineamento e la rigidità dell’ECM possono plasmare le vie angiogeniche e immunitarie. Queste proprietà rendono la lumican un utile “punto di presa” molecolare per studiare la regolazione del comportamento cellulare guidata dalla matrice in modelli di biologia del tessuto connettivo e del cancro.

Lumican Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LUM senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Lumican Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LUM nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LUM, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Lumican. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LUM nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Lumican nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Lumican nelle cellule tumorali con espressione di LUM silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.