LTK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405150

Panoramica

La tirosin-chinasi recettoriale dei leucociti (LTK) codifica una tirosin-chinasi recettoriale che partecipa alla trasduzione di segnali in risposta a fattori di crescita e alla modulazione di cascate a valle come MAPK/ERK e PI3K/AKT, influenzando proliferazione, differenziamento e sopravvivenza cellulari. L’attività di LTK è stata collegata alla regolazione di programmi secretori e di traffico intracellulare in specifici tipi cellulari, incluse alcune linee associate al sistema immunitario, in linea con ruoli nel controllo dello stato cellulare. La disregolazione della segnalazione delle tirosin-chinasi recettoriali, inclusa un’alterata espressione di LTK o un’alterazione della sua attività chinasica, è rilevante negli studi sulle reti di segnalazione oncogenica e sulla trasformazione specifica di linea cellulare. In quanto recettore di superficie accoppiato a una chinasi, LTK è inoltre utilizzato come nodo per analizzare la segnalazione mediata da fosfotirosine, il crosstalk tra recettori e il rimodellamento delle vie di segnale in seguito a perturbazioni genetiche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LTK (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LTK in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LTK insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LTK a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LTK.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LTK per lo studio della segnalazione di LTK, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LTK critici per la funzione di LTK
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LTK per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LTK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LTK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LTK. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LTK Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LTK (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LTK per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LTK definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.