Plásmido CRISPR de Activación (h) LTBP-4: sc-405419-ACT

LTBP4 codifica la proteína 4 de unión al factor de crecimiento transformante beta latente (LTBP-4), una glicoproteína de la matriz extracelular que se une a complejos latentes de TGF-β y coordina su secuestro, estabilización y activación regulada en el espacio pericelular. A través de sus interacciones con microfibrillas de fibrilina y ensamblajes asociados a la elastina, LTBP-4 favorece la formación de fibras elásticas y la organización de la matriz, modulando la mecanotransducción y la remodelación tisular. El control dependiente de LTBP-4 sobre la biodisponibilidad de TGF-β vincula este gen con la dinámica de la señalización SMAD, que influye en el comportamiento de los fibroblastos, la comunicación epitelio-mesénquima y los programas de reparación de heridas. Las alteraciones en la expresión o la función de LTBP4 se asocian con fenotipos del tejido conectivo y pulmonares, lo que respalda su relevancia en estudios de la homeostasis de la matriz extracelular y de la patología impulsada por TGF-β.

LTBP-4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LTBP4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LTBP-4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LTBP4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LTBP4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LTBP-4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LTBP4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LTBP-4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LTBP-4 en células tumorales con expresión de LTBP4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.