LTBP-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403182-ACT

LTBP2 codifica la latent transforming growth factor beta binding protein 2 (LTBP-2), una glicoproteina della matrice extracellulare che si associa a microfibrille ricche di fibrillina e contribuisce all’assemblaggio della matrice, all’elasticità e alla segnalazione cellula–matrice. Sebbene, rispetto ad altri membri della famiglia LTBP, non presenti un legame canonico con il TGF-β, LTBP-2 influenza l’architettura delle microfibrille e può modulare indirettamente la disponibilità dei fattori di crescita e le vie di meccanotrasduzione collegate al rimodellamento della matrice extracellulare. L’espressione di LTBP2 è rilevante per l’omeostasi dei tessuti connettivi e per la biologia vascolare e oculare; studi genetici e di espressione l’hanno associata a patologie che compromettono l’integrità delle microfibrille, inclusi fenotipi di glaucoma e anomalie ereditarie del tessuto connettivo. In quanto fattore associato alla matrice, LTBP-2 è spesso studiata in relazione a vie che regolano l’organizzazione dell’ECM, l’adesione e la regolazione del comportamento cellulare dipendente dalla rigidità tissutale.

LTBP-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LTBP2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LTBP-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LTBP2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LTBP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LTBP-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LTBP2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LTBP-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LTBP-2 nelle cellule tumorali con espressione di LTBP2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.