LTBP-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402289

Panoramica

LTBP1 codifica la latent transforming growth factor beta binding protein 1 (LTBP-1), una glicoproteina della matrice extracellulare che si lega al complesso latente di TGF-β e ne regola il sequestro, l’attivazione e la presentazione spaziale alle cellule. Controllando la biodisponibilità del TGF-β, LTBP-1 influenza la segnalazione dipendente da SMAD e i programmi a valle nel rimodellamento della matrice, nella transizione epitelio-mesenchimale, nell’adesione cellulare e nell’omeostasi tissutale. La funzione di LTBP1 è strettamente collegata all’organizzazione delle microfibrille di fibrillina e all’attivazione del TGF-β regolata da meccanismi meccanosensibili, mettendo in relazione l’architettura della matrice extracellulare con la segnalazione citochinica. Un’attività deregolata dell’asse LTBP1/TGF-β è implicata nel rimodellamento associato alla fibrosi, nella segnalazione stromale associata al cancro e nella patobiologia vascolare e del tessuto connettivo, risultando quindi rilevante per studi meccanicistici di fenotipi guidati dal microambiente.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LTBP-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LTBP1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LTBP1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LTBP1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LTBP-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LTBP1 per lo studio della segnalazione di LTBP-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LTBP1 critici per la funzione di LTBP-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LTBP1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LTBP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LTBP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LTBP1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LTBP-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LTBP-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LTBP1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LTBP1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.