LSM8 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404816-ACT

LSM8 umano codifica una proteina legante l’RNA di tipo Sm-like che costituisce un componente centrale della piccola ribonucleoproteina nucleare U6 e dell’anello LSm2–8, sostenendo la stabilità dell’U6 snRNA, la biogenesi delle snRNP e l’assemblaggio dello spliceosoma durante lo splicing del pre-mRNA. Attraverso queste funzioni, LSM8 contribuisce alla corretta rimozione degli introni e all’integrità del trascrittoma, collegandosi a reti di processamento dell’RNA che modulano la progressione del ciclo cellulare e programmi di espressione genica responsivi allo stress. L’alterazione dell’omeostasi dello spliceosoma e delle snRNP è ampiamente associata alla comparsa di isoforme di mRNA aberranti e a una deregolazione dell’espressione genica in molteplici contesti patologici, rendendo LSM8 un nodo utile per studi meccanicistici di fenotipi dipendenti dallo splicing. Il suo ruolo essenziale nel metabolismo dell’RNA fornisce inoltre un punto di ingresso ben definito per indagare come i fattori core dello splicing influenzino lo stato cellulare e la diversità del proteoma.

LSM8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LSM8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LSM8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LSM8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LSM8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LSM8. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LSM8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LSM8 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LSM8 nelle cellule tumorali con espressione di LSM8 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.