LRP5 Plasmide Double Nickase (h): sc-401331-NIC

LRP5 (proteina 5 correlata al recettore delle lipoproteine a bassa densità) è un co-recettore transmembrana a singolo passaggio che agisce in partnership con i recettori Frizzled per trasdurre la segnalazione canonica Wnt/β-catenina. Modulando la stabilizzazione della β-catenina e la trascrizione dipendente da TCF/LEF, LRP5 regola l’attività degli osteoblasti, l’aumento della massa ossea, lo sviluppo vascolare retinico e programmi più ampi di specificazione del destino cellulare. La funzione di LRP5 interseca modulatori e antagonisti extracellulari di Wnt, inclusi DKK e sclerostina, collegando la disponibilità del recettore sulla membrana plasmatica agli output trascrizionali a valle. La variazione genetica o la disregolazione di LRP5 è associata ad alterazioni dei fenotipi di densità ossea e a disturbi vascolari oculari, rendendolo un bersaglio ampiamente utilizzato per studi meccanicistici sul controllo della via di segnalazione Wnt.

LRP5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LRP5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LRP5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LRP5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LRP5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.