LRP130 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402029-ACT

LRPPRC codifica la proteina contenente ripetizioni pentatricopeptidiche ricche in leucina (LRP130), un fattore legante l’RNA che si localizza prevalentemente nei mitocondri e regola l’elaborazione post-trascrizionale, la stabilità e la traduzione dei trascritti codificati dal mitocondrio. Coordinando l’espressione dei componenti della fosforilazione ossidativa, LRP130 supporta l’assemblaggio della catena respiratoria, il metabolismo energetico mitocondriale e l’adattamento cellulare allo stress metabolico. LRPPRC è anche coinvolto nel controllo di qualità dell’espressione genica mitocondriale e può influenzare le vie di comunicazione mitonucleare. La deregolazione di LRPPRC è stata associata a fenotipi di disfunzione mitocondriale e alla biologia delle malattie neuro-metaboliche, rendendolo rilevante per studi sulla bioenergetica e sull’omeostasi mitocondriale.

LRP130 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LRPPRC senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LRP130 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LRPPRC nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LRPPRC, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LRP130. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LRPPRC nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LRP130 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LRP130 nelle cellule tumorali con espressione di LRPPRC silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.