LRIG2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404443-ACT

LRIG2 (leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 2) è una proteina transmembrana a singolo passaggio implicata nella modulazione della segnalazione delle tirosin-chinasi recettoriali sulla superficie cellulare, influenzando le vie a valle che regolano proliferazione, differenziamento e sopravvivenza. Tramite i suoi domini extracellulari LRR/Ig-like, LRIG2 è in grado di modulare l’intensità e la durata delle risposte ai fattori di crescita, con collegamenti funzionali riportati in contesti di segnalazione associati alla famiglia EGFR/ERBB. Un’alterata espressione di LRIG2 è stata osservata in molteplici profili trascrizionali associati a malattie, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico per lo studio della segnalazione deregolata, del controllo del destino cellulare e delle interazioni con il microambiente nelle cellule umane. Queste proprietà rendono LRIG2 un bersaglio rilevante per interrogare la regolazione, a livello prossimo alla membrana, delle vie di segnalazione e dei programmi di espressione genica associati a una crescita cellulare anomala.

LRIG2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LRIG2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LRIG2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LRIG2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LRIG2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LRIG2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LRIG2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LRIG2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LRIG2 nelle cellule tumorali con espressione di LRIG2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.