LOXL4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403384-ACT

LOXL4 umano (lysyl oxidase like 4) è un’ammina ossidasi rame-dipendente che catalizza la deaminazione ossidativa dei residui di lisina in collagene ed elastina, favorendo la reticolazione covalente e la maturazione della matrice extracellulare. Attraverso il rimodellamento della matrice, LOXL4 influenza la rigidità tissutale, l’adesione cellulare e la migrazione, integrandosi con la segnalazione ECM–integrine e con processi più ampi di riparazione delle ferite e fibrosi. Un’alterata espressione di LOXL4 è stata riportata in molteplici tumori solidi e in patologie associate al rimodellamento, in cui i cambiamenti dell’architettura del collagene possono influenzare invasione, angiogenesi e interazioni stroma-epitelio. Queste caratteristiche rendono LOXL4 un nodo utile per studiare l’organizzazione della matrice extracellulare e fenotipi dipendenti dal microambiente in modelli cellulari umani.

LOXL4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LOXL4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LOXL4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LOXL4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LOXL4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LOXL4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LOXL4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LOXL4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LOXL4 nelle cellule tumorali con espressione di LOXL4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.