LMO7 Plasmide Double Nickase (h): sc-404373-NIC

LMO7 (LIM domain only protein 7) è una proteina scaffold multifunzionale che si localizza alle giunzioni cellula–cellula, al citoscheletro di actina e nel nucleo, dove contribuisce a coordinare l’organizzazione del citoscheletro, la meccanotrasduzione e i programmi trascrizionali legati all’integrità epiteliale. Interagendo con complessi giunzionali e associati all’actina, LMO7 partecipa alla regolazione della forma cellulare, del rimodellamento dell’adesione e della segnalazione sensibile allo stress che influenza differenziamento e architettura tissutale. Un’attività alterata di LMO7 è stata associata a difetti della funzione di barriera e della dinamica del citoscheletro, e la sua disregolazione è implicata in contesti che coinvolgono transizioni epitelio–mesenchimali, comportamento invasivo e rimodellamento associato ai tumori. Queste caratteristiche rendono LMO7 un bersaglio utile per studiare la segnalazione dipendente dall’adesione, la comunicazione citoscheletro–nucleo e l’omeostasi delle giunzioni in modelli cellulari umani.

LMO7 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LMO7 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LMO7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LMO7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LMO7 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.