LKLF/KLF2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400918-LAC

KLF2 (LKLF) codifica un fattore di trascrizione a dita di zinco che contribuisce a mantenere la quiescenza endoteliale e regola il tono vascolare, l’espressione di geni antinfiammatori e la funzione di barriera in risposta allo shear stress emodinamico. Integra segnali provenienti dalle vie MAPK, PI3K/AKT e NF-κB per modulare programmi trascrizionali che controllano molecole di adesione, risposte citochiniche e fattori legati alla coagulazione. Nelle cellule immunitarie, KLF2 influenza il traffico e lo stato di attivazione plasmando l’espressione dei recettori per le chemochine e dei geni di homing. Un’attività disfunzionale di KLF2 è stata associata a infiammazione vascolare, processi aterosclerotici, fenotipi correlati alla trombosi e alterata regolazione immunitaria, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici nella biologia cardiometabolica e dell’infiammazione.

Le particelle di attivazione lentivirale LKLF/KLF2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di KLF2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale LKLF/KLF2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione KLF2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di LKLF/KLF2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo KLF2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.