LKLF/KLF2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400918

Panoramica

KLF2 (nota anche come LKLF) codifica un fattore di trascrizione a dita di zinco di tipo Krüppel-like che contribuisce a mantenere l’omeostasi delle cellule endoteliali e immunitarie coordinando programmi genici responsivi allo stress da shear. Nell’endotelio vascolare, KLF2 integra la meccanotrasduzione con il controllo trascrizionale di vie antinfiammatorie, antitrombotiche e di stabilizzazione della barriera, inclusa la modulazione della segnalazione dell’ossido nitrico e dell’espressione delle molecole di adesione. Nelle linee ematopoietiche, KLF2 influenza la quiescenza, il traffico e la differenziazione delle cellule T attraverso la regolazione dei recettori per le chemochine e di reti trascrizionali associate all’attivazione. Un’attività deregolata di KLF2 è stata collegata all’infiammazione vascolare e a processi legati all’aterosclerosi, e un’espressione alterata è stata riportata in molteplici contesti di cancro e di disregolazione immunitaria, a supporto del suo impiego come nodo funzionale negli studi di dissezione delle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LKLF/KLF2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KLF2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KLF2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KLF2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LKLF/KLF2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KLF2 per lo studio della segnalazione di LKLF/KLF2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KLF2 critici per la funzione di LKLF/KLF2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KLF2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LKLF/KLF2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LKLF/KLF2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KLF2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LKLF/KLF2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LKLF/KLF2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KLF2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KLF2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.