Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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LITAF Double Nickase Plasmid (h): sc-404337-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LITAF Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LITAF Double-Nickase-Plasmid (h) und LITAF Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LITAF abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LITAF: sc-166719
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LITAF Double Nickase Plasmid (h) | sc-404337-NIC | 20 µg | $410.00 |
LITAF (lipopolysaccharid-induzierter TNF-Faktor) ist ein kleiner, endosomenassoziierter transkriptioneller Regulator, der an der angeborenen Immun-Signalübertragung und der Expression entzündungsrelevanter Gene beteiligt ist, einschließlich der Modulation von Outputs des TNF-Signalwegs. Über seine C‑terminale SIMPLE/LITAF-Domäne wirkt es an Membrantransport sowie endolysosomalen Prozessen mit und beeinflusst dabei ubiquitinabhängige Sortierung und den Abbau (Turnover) von Signalkomponenten. Die Aktivität von LITAF wurde mit zellulären Antworten auf mikrobielle Stimuli und Stress in Verbindung gebracht, mit nachgeschalteten Effekten auf Zytokinnetzwerke und NF‑κB-assoziierte Transkriptionsprogramme. Eine Fehlregulation oder Mutation von LITAF wurde mit neurodegenerativen und entzündlichen Phänotypen assoziiert; zudem gibt es Berichte, die eine veränderte LITAF-Funktion mit peripherer Neuropathie und einer aberranten Zytokinregulation verknüpfen.
LITAF Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LITAF-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LITAF abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LITAF-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LITAF-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.