Lipocalin-15 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-415842

Panoramica

LCN15 codifica la lipocalina-15, un membro della famiglia delle lipocaline, proteine secrete che legano e trasportano piccoli ligandi idrofobici, inclusi lipidi e metaboliti di tipo retinoide. Attraverso la sequestrazione e il rilascio dei ligandi, la lipocalina-15 è in grado di influenzare la segnalazione extracellulare, l’omeostasi di membrana e la comunicazione intercellulare nei microambienti tissutali. Un’espressione alterata delle lipocaline è stata associata a infiammazione, risposte allo stress metabolico e rimodellamento epiteliale, rendendo LCN15 un bersaglio utile per analizzare le vie di gestione dei lipidi e di adattamento allo stress. Lo studio della funzione di LCN15 può chiarire i meccanismi che collegano le proteine carrier secrete alla regolazione paracrina e ai cambiamenti dello stato cellulare associati alle malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Lipocalin-15 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LCN15 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LCN15 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LCN15 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Lipocalin-15.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LCN15 per lo studio della segnalazione di Lipocalin-15, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LCN15 critici per la funzione di Lipocalin-15
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LCN15 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Lipocalin-15 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Lipocalin-15 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LCN15. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Lipocalin-15 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Lipocalin-15 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LCN15 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LCN15 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.