Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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LIMP II Plasmide Double Nickase (h): sc-402532-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LIMP II Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LIMP II Double Nickase Plasmid (h) e il LIMP II Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SCARB2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LIMP II Antibody (D-3): sc-55570
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LIMP II Plasmide Double Nickase (h) | sc-402532-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LIMP II Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402532-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SCARB2 codifica la proteina integrale di membrana lisosomiale 2 (LIMP II), una glicoproteina di membrana di tipo III che supporta il traffico endolisosomiale e la biogenesi dei lisosomi. LIMP II funge da recettore di smistamento per la glucocerebrosidasi e contribuisce al catabolismo dei lipidi, alla stabilità della membrana lisosomiale e al turnover associato all’autofagia. SCARB2 è inoltre coinvolto in vie di internalizzazione mediate da recettore e può influenzare i processi di ingresso virale attraverso il instradamento endosomiale. La disregolazione di SCARB2/LIMP II è stata collegata a fenotipi associati all’accumulo lisosomiale e alla neurodegenerazione, rendendolo rilevante per studi sulla proteostasi dipendente dai lisosomi e sulle risposte allo stress metabolico.
LIMP II Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SCARB2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SCARB2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SCARB2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SCARB2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.