Limkain b1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-411308-LAC

KIAA0430 codifica la proteina umana Limkain b1, un fattore ancora poco caratterizzato implicato nella regolazione del citoscheletro e nell’organizzazione intracellulare. Le annotazioni disponibili e le predizioni a livello di dominio suggeriscono un ruolo in processi associati all’actina, con un potenziale impatto su morfologia cellulare, adesione e motilità attraverso vie che intersecano la segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho e le reti di rimodellamento dell’actina. Un’alterata regolazione di questi processi è spesso collegata a programmi di proliferazione e migrazione deregolati osservati nel cancro e in altre patologie complesse. Di conseguenza, KIAA0430/Limkain b1 è di interesse per studi meccanicistici di fenotipi dipendenti dal citoscheletro e della connettività tra vie di segnalazione in modelli cellulari.

Le particelle di attivazione lentivirale Limkain b1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di KIAA0430 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Limkain b1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione KIAA0430, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Limkain b1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo KIAA0430 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.