LI-cadherin Plasmide Double Nickase (h): sc-401229-NIC

CDH17 codifica la LI-caderina, una molecola di adesione cellula-cellula calcio-dipendente della superfamiglia delle caderine, arricchita nell’intestino, che sostiene la coesione e la polarità dell’epitelio. A differenza delle caderine classiche, la LI-caderina presenta un’architettura extracellulare distinta e può influenzare l’organizzazione delle giunzioni, la funzione di barriera e i programmi di differenziamento negli epiteli gastrointestinali. Le dinamiche di adesione associate a CDH17 si intrecciano con vie che regolano l’architettura e la motilità epiteliale, inclusa l’interazione con il rimodellamento del citoscheletro e con stati trascrizionali regolati da Wnt/β-catenina. Un’espressione deregolata della LI-caderina è stata riportata in diverse patologie gastrointestinali ed è spesso studiata come marcatore di linea epiteliale e di alterata organizzazione tissutale nella biologia dei tumori.

LI-cadherin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDH17 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDH17. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDH17. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDH17 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.