LHX9 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403360-ACT

LHX9 (LIM homeobox 9) codifica un fattore di trascrizione con dominio LIM che regola le decisioni sul destino cellulare durante lo sviluppo embrionale controllando programmi di espressione genica specifici di linea. Nella biologia umana, l’attività di LHX9 è associata a processi di patterning e differenziamento nel sistema nervoso in sviluppo e nei tessuti gonadici, dove è richiesto un controllo trascrizionale temporale preciso. In quanto regolatore che si lega al DNA, LHX9 interagisce con la cromatina e con reti trascrizionali che modellano i percorsi di sviluppo, e una sua espressione alterata è stata studiata in contesti di differenziamento disregolato e stati trascrizionali oncogenici. Queste caratteristiche rendono LHX9 un bersaglio utile per studiare i circuiti di regolazione genica, i fattori di trascrizione dello sviluppo e la modulazione del fenotipo guidata da cambiamenti nella trascrizione endogena.

LHX9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LHX9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LHX9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LHX9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LHX9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LHX9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LHX9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LHX9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LHX9 nelle cellule tumorali con espressione di LHX9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.