LHX5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421428

Panoramica

Lhx5 codifica il fattore di trascrizione LIM homeobox LHX5, un regolatore nucleare legante il DNA necessario per il patterning e la differenziazione del sistema nervoso centrale in sviluppo. Nel topo, LHX5 contribuisce all’identità regionale e alla specificazione delle linee neuronali attraverso programmi trascrizionali dipendenti dal dominio LIM che si intersecano con reti homeobox più ampie, responsabili del controllo della neurogenesi e della guida assonale. Un’alterazione dell’attività di LHX5 è associata a difetti nello sviluppo del prosencefalo e dell’ippocampo e ai conseguenti fenotipi neuroevolutivi, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulla formazione dei circuiti neuronali. In quanto regolatore trascrizionale, LHX5 influenza cascate di espressione genica a valle che modellano le decisioni di destino cellulare e gli stati di maturazione nei progenitori neurali e nei neuroni in differenziazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LHX5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Lhx5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Lhx5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Lhx5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LHX5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Lhx5 per lo studio della segnalazione di LHX5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Lhx5 critici per la funzione di LHX5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Lhx5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LHX5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal LHX5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Lhx5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LHX5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR LHX5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Lhx5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Lhx5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.