LHX4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421427

Panoramica

Lhx4 codifica la proteina LIM homeobox 4 (LHX4), un fattore di trascrizione che si lega al DNA tramite un homeodominio e coordina programmi di espressione genica cruciali per la definizione dei pattern embrionali e l’organogenesi. Durante lo sviluppo del topo, LHX4 contribuisce alla specificazione e alla differenziazione delle linee cellulari dell’ipofisi anteriore e, più in generale, ai processi di sviluppo neuronale, integrandosi con cofattori a dominio LIM e con reti trascrizionali di tipo homeobox. La sua attività influenza le decisioni di destino cellulare, l’impegno di linea e la regolazione trascrizionale responsiva ai morfogeni durante la formazione dei tessuti. La disregolazione delle vie di sviluppo associate a LHX4 è rilevante per la ricerca sui fenotipi ipofisari e neuroevolutivi, in cui alterazioni del dosaggio del fattore di trascrizione possono perturbare la formazione degli assi endocrini e l’istituzione dei circuiti neurali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LHX4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Lhx4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Lhx4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Lhx4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LHX4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Lhx4 per lo studio della segnalazione di LHX4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Lhx4 critici per la funzione di LHX4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Lhx4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LHX4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal LHX4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Lhx4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LHX4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR LHX4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Lhx4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Lhx4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.