Plasmide CRISPR/Cas9 KO LHX2 (h): sc-401071

Présentation

LHX2 (LIM homeobox 2) code un facteur de transcription à domaine LIM qui régule la spécification des lignages et la mise en place des tissus au cours du développement, avec des rôles majeurs dans le maintien des progéniteurs neuraux, l’aréalisation corticale et la morphogenèse des follicules pileux. En se liant à des cofacteurs LIM et à des éléments d’ADN spécifiques de séquence, LHX2 coordonne des programmes transcriptionnels associés aux décisions de destin cellulaire, au calendrier de différenciation et à des réseaux de signalisation sensibles aux morphogènes tels que la structuration dépendante de WNT et de SHH. Une activité dérégulée de LHX2 a été associée à des trajectoires neurodéveloppementales altérées ainsi qu’à des états transcriptionnels aberrants observés dans plusieurs contextes cancéreux. En tant que régulateur nucléaire, LHX2 constitue un nœud utile pour disséquer les circuits de régulation génique qui couplent des programmes développementaux à des phénotypes de prolifération et de différenciation dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LHX2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LHX2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LHX2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LHX2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LHX2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LHX2 pour l'étude de la signalisation de LHX2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LHX2 essentiels à la fonction de LHX2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LHX2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LHX2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LHX2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LHX2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LHX2 plasmide HDR (h) et le LHX2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LHX2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LHX2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.