LHX1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403100-ACT

LHX1 (LIM homeobox 1) codifica un fattore di trascrizione contenente un dominio LIM che coordina la specificazione di linea e il patterning dei tessuti durante l’embriogenesi, includendo ruoli nello sviluppo neurale, renale e del tratto riproduttivo. Legandosi al DNA tramite il suo homeobox e assemblando complessi trascrizionali attraverso interazioni mediate dal dominio LIM, LHX1 regola programmi che controllano le decisioni di destino cellulare, la morfogenesi e la differenziazione. Un’espressione deregolata di LHX1 o un’alterazione dei circuiti di sviluppo è stata implicata in anomalie congenite ed è stata osservata in stati trascrizionali associati al cancro in cui vengono riattivati regolatori dello sviluppo. In quanto nodo nelle reti regolatorie geniche dello sviluppo, LHX1 è spesso studiato nella differenziazione delle cellule staminali, in modelli di organogenesi e nel controllo trascrizionale dell’identità tissutale.

LHX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LHX1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LHX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LHX1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LHX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LHX1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LHX1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LHX1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LHX1 nelle cellule tumorali con espressione di LHX1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.