LENG4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-408536

Panoramica

MBOAT7 codifica una O-aciltransferasi di membrana legata al reticolo endoplasmatico, che rimodella il fosfatidilinositolo incorporando arachidonil-CoA, contribuendo così a definire la composizione dei fosfoinositidi cellulari e la segnalazione a valle. Attraverso i suoi effetti sull’omeostasi dei lipidi di membrana, MBOAT7 influenza nodi di segnalazione derivati dal PI che regolano il traffico vescicolare, la dinamica del citoscheletro e le risposte infiammatorie. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di MBOAT7 sono state associate a fenotipi metabolici ed epatici, inclusa la suscettibilità alla disregolazione lipidica e al danno epatico, rendendolo rilevante per studi di immunometabolismo e segnalazione da stress. LENG4 (leukocyte receptor cluster member 4) è una proteina umana con ruoli emergenti in contesti associati al sistema immunitario, e supporta l’analisi a livello di pathway del crosstalk tra segnalazione lipidica e immunità in modelli cellulari pertinenti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LENG4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MBOAT7 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MBOAT7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MBOAT7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LENG4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MBOAT7 per lo studio della segnalazione di LENG4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MBOAT7 critici per la funzione di LENG4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MBOAT7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LENG4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LENG4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MBOAT7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LENG4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LENG4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MBOAT7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MBOAT7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.