Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Legumain Plasmide Double Nickase (h): sc-402437-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Legumain Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Legumain Double Nickase Plasmid (h) e il Legumain Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LGMN. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Legumain Antibody (B-8): sc-133234
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Legumain Plasmide Double Nickase (h) | sc-402437-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Legumain Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402437-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LGMN codifica per la legumaina, un’endopeptidasi asparaginilica lisosomiale che contribuisce al processamento proteolitico delle proteine endocitate e alla presentazione dell’antigene attraverso le vie del complesso maggiore di istocompatibilità (MHC) di classe II. Modellando la funzione dei lisosomi e il rimodellamento della matrice extracellulare tramite reti di proteasi, la legumaina influenza la regolazione immunitaria, il turnover tissutale e le risposte allo stress legate al traffico endo-lisosomiale. Un’espressione o un’attività di LGMN deregolate sono state associate alla biologia del microambiente tumorale, a condizioni infiammatorie e a processi neurodegenerativi in cui sono prominenti alterazioni della proteostasi e delle vie lisosomiali.
Legumain Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LGMN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LGMN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LGMN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LGMN interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.