Latrophilin-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403945-ACT

ADGRL2 codifica la latrofilina-2, un GPCR di adesione arricchito sulla superficie cellulare, dove media la comunicazione cellula-cellula, l’organizzazione sinaptica e la segnalazione dipendente dall’adesione. Attraverso l’accoppiamento a proteine G eterotrimeriche e le interazioni con ligandi extracellulari, la latrofilina-2 può influenzare le vie dei secondi messaggeri, il rimodellamento del citoscheletro e la formazione dei circuiti neuronali. L’attività di ADGRL2 è stata collegata a processi rilevanti per il neurosviluppo e la connettività, rendendolo utile per analizzare i meccanismi di segnalazione che regolano la maturazione delle sinapsi e la stabilità delle reti. La disregolazione della segnalazione dei GPCR di adesione è studiata anche in contesti di alterata adesione e migrazione cellulare, supportando indagini più ampie sulle perturbazioni di via in modelli di malattia.

Latrophilin-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ADGRL2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Latrophilin-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ADGRL2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ADGRL2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Latrophilin-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ADGRL2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Latrophilin-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Latrophilin-2 nelle cellule tumorali con espressione di ADGRL2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.