Latrophilin-1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-408830-LAC

ADGRL1 codifica la latrofilina-1, un recettore di adesione accoppiato a proteine G (GPCR) che integra segnali di adesione extracellulari con la segnalazione intracellulare per regolare lo sviluppo delle sinapsi, la crescita dei neuriti e la formazione delle reti neuronali. Attraverso interazioni con ligandi endogeni e l’accoppiamento a proteine G eterotrimeriche, la latrofilina-1 influenza vie di secondi messaggeri e il rimodellamento del citoscheletro che modellano la comunicazione cellula–cellula. La segnalazione associata ad ADGRL1 è stata collegata a fenotipi di neurosviluppo e ad alterazioni della connettività sinaptica, rendendola rilevante per lo studio dei meccanismi alla base dell’assemblaggio dei circuiti e della plasticità funzionale. La sua espressione e la segnalazione mediata dal recettore offrono inoltre un punto d’accesso maneggevole per analizzare la biologia dei GPCR di adesione in sistemi cellulari neurali umani e in modelli cellulari.

Le particelle di attivazione lentivirale Latrophilin-1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ADGRL1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Latrophilin-1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ADGRL1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Latrophilin-1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ADGRL1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.