LAPTM5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404229-ACT

A LAPTM5 (proteína transmembrana lisossomal 5) é uma proteína de membrana lisossomal/endossomal enriquecida em células hematopoéticas que regula o tráfego intracelular e a atenuação de sinais em células imunes. Ela participa do transporte mediado por vesículas e da renovação dependente de lisossomos de componentes de sinalização, ajudando a moldar vias proximais ao receptor, como a sinalização de receptores de antígeno, respostas a citocinas e degradação dependente de ubiquitina. Por seus papéis na organização endolisossomal e na homeostase da sinalização imune, a LAPTM5 é relevante para estudos de ativação de leucócitos, regulação inflamatória e programas de sinalização desregulados observados em diferentes contextos de doenças hematológicas. Sua expressão e função também são exploradas para investigar como o tráfego associado aos lisossomos influencia decisões de destino celular e a proteostase em linhagens imunes.

LAPTM5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LAPTM5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LAPTM5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LAPTM5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LAPTM5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LAPTM5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LAPTM5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LAPTM5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LAPTM5 em células tumorais com expressão de LAPTM5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.