LAMP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400120-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LAMP1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LAMP1 Double Nickase Plasmid (h) e il LAMP1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LAMP1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LAMP1 Antibody (H4A3): sc-20011
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LAMP1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400120-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LAMP1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400120-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LAMP1 (proteina 1 associata alla membrana lisosomiale) è una proteina di membrana di tipo I altamente glicosilata, arricchita su lisosomi ed endosomi tardivi, dove sostiene l’integrità dell’organello e contribuisce al posizionamento dei lisosomi, alle dinamiche di fusione e al turnover del carico. Attraverso i suoi ruoli nelle vie autofagia–lisosoma, nel traffico endocitico e nella stabilità della membrana lisosomiale, LAMP1 aiuta a coordinare la capacità degradativa con le risposte cellulari allo stress. LAMP1 partecipa anche alla degranulazione delle cellule immunitarie e ai processi di processamento dell’antigene, collegando la funzione lisosomiale alla segnalazione infiammatoria. Una biologia lisosomiale disregolata che coinvolge LAMP1 è stata associata a neurodegenerazione, malattie da accumulo lisosomiale, interazioni ospite–patogeno legate alle infezioni e fenotipi di invasione e metastasi delle cellule tumorali.
LAMP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LAMP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LAMP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LAMP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LAMP1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.