Plasmide Double Nickase (h) Laminin β-2: sc-402612-NIC

LAMB2 code la laminine β-2, une sous-unité essentielle de glycoprotéine de la matrice extracellulaire qui s’assemble en hétérotrimères de laminine au sein des membranes basales. La laminine β-2 favorise l’adhérence, la migration et la polarisation cellulaires en reliant la matrice à des récepteurs tels que les intégrines et le dystroglycane, coordonnant ainsi l’organisation du cytosquelette et les voies de signalisation de survie. Elle est particulièrement importante dans des membranes basales spécialisées, notamment celles de la barrière de filtration glomérulaire et des synapses neuromusculaires, où elle contribue au maintien de l’intégrité structurelle et des fonctions spécifiques des tissus. Une expression altérée de LAMB2 ou des variants pathogènes sont associés à des phénotypes de dysfonctionnement de la membrane basale, ce qui en fait une cible utile pour étudier la signalisation matrice extracellulaire–cellule ainsi que les voies impliquées dans la filtration ou l’architecture synaptique.

Laminin β-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LAMB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LAMB2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LAMB2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LAMB2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.