Laminin β-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402612-NIC

LAMB2 codifica la laminina β-2, una subunità essenziale di glicoproteina della matrice extracellulare che si assembla in eterotrimeri di laminina all’interno delle membrane basali. La laminina β-2 sostiene l’adesione, la migrazione e la polarizzazione cellulare collegando la matrice a recettori quali integrine e distroglicano, coordinando così l’organizzazione del citoscheletro e i segnali di sopravvivenza. È particolarmente rilevante per membrane basali specializzate, incluse quelle della barriera di filtrazione glomerulare e delle sinapsi neuromuscolari, dove contribuisce a mantenere l’integrità strutturale e la funzione specifica del tessuto. Alterazioni dell’espressione di LAMB2 o varianti patogene sono associate a fenotipi di disfunzione della membrana basale, rendendolo un bersaglio utile per lo studio della segnalazione matrice extracellulare–cellula e dei pathway legati alla filtrazione o all’architettura sinaptica.

Laminin β-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LAMB2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LAMB2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LAMB2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LAMB2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.