Laminin α-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401176-ACT

LAMA1 codifica la laminina α-1, una subunità principale della laminina-111 e di eterotrimeri di laminina della membrana basale correlati, che organizzano la matrice extracellulare e regolano l’architettura dei tessuti. Attraverso interazioni con integrine, distroglicano e altri recettori della matrice, la laminina α-1 sostiene l’adesione cellulare, la polarità, la migrazione e la sopravvivenza, e influenza vie di segnalazione come adesioni focali/FAK, PI3K–AKT e MAPK. LAMA1 è particolarmente importante nella morfogenesi dello sviluppo e nell’integrità della membrana basale epiteliale ed endoteliale, modellando il dialogo cellula–matrice e la meccanotrasduzione. Reti di laminina deregolate e un’espressione alterata di LAMA1 sono implicate in disturbi congeniti della membrana basale, fenotipi di neurosviluppo e nel rimodellamento patologico osservato in diversi contesti oncologici e fibrotici.

Laminin α-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LAMA1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Laminin α-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LAMA1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LAMA1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Laminin α-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LAMA1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Laminin α-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Laminin α-1 nelle cellule tumorali con espressione di LAMA1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.