Lamin B2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401873-ACT

LMNB2 codifica la lamina B2, un componente fondamentale della lamina nucleare che polimerizza al di sotto della membrana nucleare interna per mantenere la forma del nucleo e la stabilità meccanica. La lamina B2 partecipa all’ancoraggio della cromatina, alla regolazione della tempistica di replicazione del DNA e al riassemblaggio dell’involucro nucleare durante la mitosi, collegando l’organizzazione del genoma alla progressione del ciclo cellulare e alle risposte allo stress. Attraverso interazioni con i domini associati alle lamine e con i complessi del poro nucleare, influenza programmi trascrizionali e vie di mantenimento dell’integrità genomica. Un’alterazione della funzione della famiglia delle lamine B è associata a difetti dell’architettura nucleare, a un’organizzazione anomala della cromatina e a fenotipi rilevanti per l’invecchiamento precoce, il neurosviluppo e la biologia delle cellule tumorali.

Lamin B2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LMNB2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Lamin B2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LMNB2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LMNB2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Lamin B2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LMNB2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Lamin B2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Lamin B2 nelle cellule tumorali con espressione di LMNB2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.