Lamin B1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400032-ACT

LMNB1 codifica la lamina B1, un componente principale della lamina nucleare che sostiene l’architettura del nucleo e ancora l’eterocromatina periferica. La lamina B1 coordina l’organizzazione della cromatina, la replicazione e la riparazione del DNA e le dinamiche dell’involucro nucleare durante la mitosi, integrando segnali meccanici con programmi trascrizionali. Attraverso interazioni con i domini associati alla lamina e con i complessi dei pori nucleari, contribuisce a regolare la stabilità del genoma e la progressione del ciclo cellulare. Alterazioni del dosaggio di LMNB1 o dell’integrità della lamina nucleare sono state collegate a fenotipi neurodegenerativi e demielinizzanti e sono spesso studiate nel contesto delle laminopatie, dei difetti nucleari associati all’invecchiamento e della plasticità delle cellule tumorali.

Lamin B1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LMNB1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Lamin B1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LMNB1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LMNB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Lamin B1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LMNB1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Lamin B1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Lamin B1 nelle cellule tumorali con espressione di LMNB1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.