L-Plastin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402131-ACT

LCP1 codifica per L-plastina, una proteina che raggruppa i filamenti di actina, espressa prevalentemente nelle cellule ematopoietiche, che stabilizza l’actina filamentosa e supporta il rimodellamento dinamico del citoscheletro. Attraverso la regolazione della formazione dei lamellipodi, dell’adesione integrina-dipendente e dell’architettura della sinapsi immunologica, L-plastina influenza l’attivazione dei leucociti, la chemiotassi e le funzioni fagocitiche. La sua attività interseca vie di segnalazione che coordinano motilità e adesione, inclusi gli effettori a valle di PI3K e piccole GTPasi che collegano i segnali dei recettori all’organizzazione dell’actina. Un’espressione o una fosforilazione deregolata di LCP1 è stata associata ad alterazioni del comportamento delle cellule immunitarie ed è stata riportata in contesti di infiammazione e invasività delle cellule tumorali, rendendola rilevante per studi meccanicistici su migrazione e infiltrazione tissutale.

L-Plastin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LCP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

L-Plastin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LCP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LCP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di L-Plastin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LCP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da L-Plastin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via L-Plastin nelle cellule tumorali con espressione di LCP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.